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綿羊重組朊蛋白的原核表達與結構分析

時間:2023-05-02 14:21:47 生物醫學論文 我要投稿
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綿羊重組朊蛋白的原核表達與結構分析

利用DNA重組技術,將綿羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrPc插入表達載體pET30a,在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達,獲得的表達產物為綿羊朊蛋白OvPrP(23~256).經SDS-PAGE分析,表達產物以包涵體形式存在.將包涵體蛋白用8 mol/L尿素溶解,在變性條件下經Ni-NTA柱親和層析純化,而鎳柱能競爭性結合含有6×His標簽的pET30a表達的目的蛋白.由于目的蛋白是在變性條件下純化的,需要將其復性后才能恢復天然構象.采用梯度尿素透析復性后,復性率為25%左右.為了進行重組朊蛋白的結構分析,將重組蛋白進行超濾濃縮,至蛋白濃度為0.4 mg/mL時,采用遠紫外線圓二色譜(CD)分析其二級結構,并對其高級結構進行了預測.結果表明:通過Western-blotting鑒定,表達的綿羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23~256)的分子量為25172.80 u左右.經過Jascow32軟件分析后,測得OvPrP(23~256)的二級結構含量為:α螺旋為39.4%,β折疊為0%,轉角為0%,無規卷曲為60.6%.綿羊重組朊蛋白高級結構的分析為朊病毒疾病的發生機理的探討提供科學依據.

綿羊重組朊蛋白的原核表達與結構分析

作 者: 劉美麗 趙德明 周向梅 尹小敏 LIU Mei-li ZHAO De-ming ZHOU Xiang-mei YIN Xiao-min   作者單位: 中國農業大學,國家動物海綿狀腦病實驗室,北京,100094  刊 名: 中國預防獸醫學報  ISTIC PKU 英文刊名: CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE  年,卷(期): 2006 28(6)  分類號: Q78  關鍵詞: 綿羊朊病毒蛋白   原核表達   圓二色譜   結構分析  

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