苦瓜MAP30基因的畢赤酵母表達載體構建及重組菌株的篩選

目的:從苦瓜中克隆MAYO全長基因,并將該基因連接至表達載體pPIC9中,建立酵母菌落PCR篩選方法.方法采用改良SDS法從苦瓜表皮中提取基因組DNA,設計特異件的引物,通過PCR技術擴增出全長861bp的MAP30基因.該基因經Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切,連接至畢赤酵母表達載體pPIC9中.重組載體轉化GS115菌株,運用菌落PCR鑒定重組菌株.結果:基因測序表明,該基因已成功插入酵母表達載體pPIC9α-factor分泌信號下游,同源性分析表明該基因與GeneBank(AF284811)的核骨酸同源性達99.9%,氨基酸同源性達100%.菌落PCR顯示外源基因已整合人酵母GS115菌株中.結論:成功地克隆了MAP30全長基因,并構建了含MAP30基因的重組畢赤酵母表達載體,并獲得了整合菌株,為下一步研究奠定了基礎.

作 者： 楊威威 沈曉曉 鄭珍珍 朱振洪   作者單位： 浙江中醫藥大學生物工程學院,浙江杭州,310053  刊 名： 生物技術  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 20(2)  分類號： Q782 Q784  關鍵詞： 苦瓜   MAP30   畢赤酵母   表達載體   Momordica charantia L   MAP30   Pichia pastoris   expression vector  

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