人IP-10啟動(dòng)子的克隆和轉(zhuǎn)錄活性的檢測(cè)

目的克隆干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)5′非編碼區(qū)(NCR)片段,檢測(cè)克隆的IP-10啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶報(bào)告基因在LPS激活的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中的轉(zhuǎn)錄活性.方法提取人外周血淋巴細(xì)胞基因組DNA,以其為模板,利用巢式PCR擴(kuò)增人IP-10啟動(dòng)子片段,測(cè)序正確后克隆入熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體pGL3;將重組質(zhì)粒pGL3/IP-10P導(dǎo)入HUVEC細(xì)胞,檢測(cè)LPS刺激下熒光素酶活性.結(jié)果正確克隆出人IP-10啟動(dòng)子(-2028～-1)片段,成功構(gòu)建了pGL3/IP-10P報(bào)告基因表達(dá)載體;證實(shí)了LPS可誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞中IP-10的高表達(dá).結(jié)論成功克隆出人的IP-10啟動(dòng)子片段,并利用熒光素報(bào)告基因證實(shí)了在HUVEC細(xì)胞中LPS可誘導(dǎo)IP-10高轉(zhuǎn)錄表達(dá),為深入研究LPS誘導(dǎo)IP-10轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控機(jī)制提供了基礎(chǔ).

作 者： 邵紫韞 劉志鋒 彭毅 鄧鵬 姜勇   作者單位： 510515,廣州,南方醫(yī)科大學(xué)廣東省功能蛋白質(zhì)組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室  刊 名： 解放軍醫(yī)學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY  年，卷(期)： 2006 31(3)  分類號(hào)： Q291  關(guān)鍵詞： 干擾素誘導(dǎo)蛋白10   脂多糖類   基因,報(bào)告  

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