利用堿性磷酸酶融合表達技術研究神經(jīng)導向因子netrin-4的功能

目的:采用堿性磷酸酶(AP4)標記技術研究netrin-4的神經(jīng)導向功能和受體結(jié)合特征,并評估堿性磷酸酶作為標簽分子在真核基因功能研究中的意義.方法:將netrin-4全長及3個結(jié)構(gòu)域編碼區(qū)cDNA克隆到堿性磷酸酶表達載體APtag4,成功構(gòu)建真核表達載體AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT,進而在COS7細胞中表達出含有AP標簽的融合蛋白,并通過神經(jīng)組織塊培養(yǎng)技術和神經(jīng)元原代培養(yǎng)技術對其活性進行鑒定.結(jié)果:確認了netrin-4的神經(jīng)突起導向功能.進一步通過對AP標簽進行檢測,發(fā)現(xiàn)netrin-4全長、LNT和NCT可與原代培養(yǎng)的神經(jīng)元表面相結(jié)合,而EGFL不結(jié)合,說明神經(jīng)元表面含有netrin-4受體或結(jié)合位點,且可能通過LNT和NCT結(jié)構(gòu)域起作用.結(jié)論:netrin-4具有明確的神經(jīng)突起導向功能,在神經(jīng)元表面含有結(jié)合位點,同時發(fā)現(xiàn)堿性磷酸酶標簽融合表達技術在真核基因功能研究方面具有一定優(yōu)勢.

作 者： 秦樹桐 高艷 王利紅 周仁平 張成崗 QIN Shu-Tong GAO Yan WANG Li-Hong ZHOU Ren-Ping ZHANG Cheng-Gang   作者單位： 秦樹桐,高艷,王利紅,張成崗,QIN Shu-Tong,GAO Yan,WANG Li-Hong,ZHANG Cheng-Gang(軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所,北京,100850)

周仁平,ZHOU Ren-Ping(Department of Chemical Biology,College of Pharmacy,Rutgers University,Piscataway,NJ 08854,USA) 

刊 名： 軍事醫(yī)學科學院院刊  ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 30(3)  分類號： Q78  關鍵詞： 神經(jīng)導向因子   netrin-4   堿性磷酸酶   融合表達   基因   神經(jīng)元  

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